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Annexin V-FITC/ PI熒光雙染細胞凋亡檢測試劑盒
貨號：P-CA-201
價格：￥500￥1000￥1680￥2680
- 20Assays
- 50Assays
- 100Assays
- 200Assays
產品概述
保存條件
2~8℃可保存1年。Annexin V-FITC禁止冷凍保存。
實驗原理
Annexin V-FITC/PI 熒光雙染細胞凋亡檢測試劑盒，可用于檢測懸浮細胞和貼壁細胞的凋亡。
Annexin V是一種鈣離子依賴性磷脂結合蛋白，與磷脂酰絲氨酸 (PS) 有高度親和力。當細胞發生凋亡時，膜內側的磷脂酰絲氨酸 (PS) 外翻到膜表面，而被熒光染料FITC標記的Annexin V結合，可通過流式細胞儀或熒光顯微鏡進行檢測。
由于凋亡晚期或壞死細胞膜喪失完整性，而碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）可與雙鏈DNA特異性結合并產生強烈的熒光，與Annexin V搭配使用，可區分處于不同凋亡時期的細胞。
本試劑盒檢測喜樹堿誘導的Jurkat細胞凋亡效果如下圖所示：
試劑配制
1×Annexin V Binding Buffer：取1 mL Annexin V Binding Buffer (10×)加入9 mL去離子水中混勻。
實驗操作
一步法
1． 細胞按照實驗方案進行凋亡誘導，300 ×g離心5 min，棄上清，收集細胞，PBS洗滌一次，輕輕重懸細胞并計數。
2． 取1~5 × 105重懸的細胞，300 ×g離心5 min，棄上清。用PBS洗滌細胞一次，離心后棄上清，加入500 μL稀釋的1 × Annexin V Binding Buffer重懸細胞。
3． 細胞懸液中加入5 μL的Annexin V-FITC染色液和5 μL的PI染色液 (50μg/mL)。
4． 輕柔渦旋混勻后，室溫避光孵育15~20 min。
5． 立即上機檢測。如不能及時檢測，請于冰上避光靜置并于1小時內完成檢測。
注：流式細胞儀檢測時Annexin V-FITC可用FITC通道，PI優先選擇PerCP/Cy5.5通道，其次是ECD通道。
兩步法
1． 細胞按照實驗方案進行凋亡誘導，300 ×g離心5 min，棄上清，收集細胞，PBS洗滌一次，輕輕重懸細胞并計數。
2． 取1~5 × 105重懸的細胞，300 ×g離心5 min，棄上清。用PBS洗滌細胞一次，離心后棄上清，加入100 μL稀釋的1 × Annexin V Binding Buffer重懸細胞。
3． 細胞懸液中加入2.5 μL的Annexin V-FITC 染色液和2.5 μL的PI染色液(50μg/mL)。（由于兩步法分辨率更高，染色液用量減半依然可得到媲美一步法的效果；用戶亦可根據自己的模型進行滴定后加入適量的染色液，用更少的量獲得高質量的結果。）
4． 輕柔渦旋混勻后，室溫避光孵育15~20 min。
5． 加入400 μL稀釋的1 × Annexin V Binding Buffer，混勻樣本。
6． 立即上機檢測。如不能及時檢測，請于冰上避光靜置并于1小時內完成檢測。
注：流式細胞儀檢測時Annexin V-FITC可用FITC通道，PI優先選擇PerCP/Cy5.5通道，其次是ECD通道。
注意事項
1. 本產品僅供科研使用。
2. 檢測貼壁細胞時，需收集誘導凋亡后產生的懸浮細胞，并與后續收集的貼壁細胞一起檢測。
3. 應盡量避免消化貼壁細胞帶來的機械損傷。同時，胰酶的消化液中應盡量不含EDTA，因為EDTA會影響Annexin V與磷脂酰絲氨酸的結合。
4. 如果使用含EDTA的胰酶，收集細胞后應充分清洗，確保EDTA被去除干凈。
5. 染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數量增加。
6. 熒光物質均易發生淬滅，在進行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
7. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
(本試劑產品僅供科學研究或進一步生產使用，不可用于臨床診斷或治療)
產品手冊
參考文獻
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影響因子 ：3.800
引用產品：CL-0007 CL-0093 CL-0149 CL-0150B CL-0152B CL-0525 P-CA-201
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Six first-line tyrosine kinase inhibitors reveal novel inhibition potential for the EGFR S768I mutation(2023/01/20)
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期刊：TOXICOLOGY AND APPLIED PHARMACOLOGY
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影響因子 ：3.800
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Sema3A inactivates the ERK/JNK signalling pathways to alleviate inflammation and oxidative stress in lipopolysaccharide-stimulated rat endothelial cells and lung tissues(2023/04/26)
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Gingerol ameliorates neuronal damage induced by hypoxia-reoxygenation via the miR-210/brain-derived neurotrophic factor axis(2021/12/28)
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引用產品：P-CA-201
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Apatinib Functioned as Tumor Suppressor of Synovial Sarcoma through Regulating miR-34a-5p/HOXA13 Axis(2022/10/12)
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引用產品：P-CA-201
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作者：Haoyu Yuan, Baohua Wang, Zicheng Ye
期刊：MOLECULAR BIOTECHNOLOGY
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影響因子 ：2.600
引用產品：P-CA-201
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Anti-inflammatory effect of Irisin on LPS-stimulated macrophages through inhibition of MAPK pathway(2023/04/30)
作者：Y Ma, Y Du, J Yang, Q He
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